慢病毒感染细胞：为什么感染效率如此低下？慢病毒因其能够有效感染分裂或非分裂细胞，并将外源基因稳定整合到宿主染色体上，实现长期表达，同时产生的免疫反应相对较小，因此被称为“细胞实验的理想选择与体内实验的必要工具”。在基因治疗中，慢病毒作为优质载体，广泛应用于各种遗传性和后天疾病的治疗，从基础研究到临床实践，高纯度、高滴度的慢病毒都是基因操作的首选工具。

不同的细胞类型会对慢病毒感染效率产生影响，因此，提高慢病毒的感染效率关键在于合理的实验步骤和最佳的实验条件。以“24孔培养板、贴壁细胞”为例，慢病毒感染细胞的基本操作流程如下：

实验步骤

Day 0 - 接种细胞：在每孔中接种5×待感染细胞，并使用含有10% FBS的DMEM培养基进行培养。

Day 1 - 细胞感染：感染前，按照说明书制备感染液，弃去旧培养基，添加感染液。根据细胞的MOI值计算病毒使用量，并加入病毒进行感染，充分混匀。

Day 2 - 培养基更换：病毒感染8-16小时后，换回常规培养基，继续培养细胞。

Day 3-4 - 确认感染效果：感染72小时后，通过显微镜观察感染效果，例如EGFP或Cherry的表达情况。

但是，如果你认为所有细胞操作都如此简单，那你就太年轻、太天真了！在慢病毒感染过程中，有哪些潜在问题呢？首先，MOI（Multiplicity of Infection，复感染指数）是一个至关重要的指标。MOI越高，细胞感染的难度就越大。通常情况下，将能使某株细胞达到80%感染的病毒颗粒数量与细胞数量的比值定义为该细胞的MOI，计算公式为：

MOI = (病毒滴度 × 病毒体积) / 细胞数量

感染条件及MOI选择原则：

• 在细胞形态不受影响的情况下，尽量使用较少的病毒感染细胞。
• 选择感染效率接近80%的条件作为最佳状态。

通过细胞感染的预实验，可以确定慢病毒对细胞的最佳感染条件，从而确定细胞的MOI，并为正式实验做好准备。

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