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大鼠原代脂肪间充质干细胞提取研究——尊龙凯时助力生物医疗创新

发布时间:2025-02-03   信息来源:连烟俊

尊龙凯时在大鼠原代脂肪间充质干细胞提取方面的实验流程如下:

大鼠原代脂肪间充质干细胞提取研究——尊龙凯时助力生物医疗创新

1. 实验材料准备

选择约2周龄或体重约200克的SD大鼠。实验所需的器械包括灭菌镊子、眼科直剪、眼科弯剪及磁珠等。准备5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板及图钉用于固定大鼠。同时需准备75%乙醇进行消毒,并备齐预冷的无菌PBS水、15mL和50mL的无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶等。此外,使用的培养基为大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基。

2. 实验操作

将所有物品置于超净工作台上,进行30分钟的紫外消毒。配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶,并进行过滤以除菌。将大鼠通过脱颈法处死后,浸泡于75%酒精中2-3分钟,然后固定于超净工作台的泡沫板上。小心剪开大鼠腹股沟区皮肤,直至腹腔,从而暴露脂肪组织。仔细剪下脂肪组织并放入PBS中,确保不剪到血管。用PBS洗净脂肪组织,并去除多余的血管和淋巴结。

将脂肪组织剪碎至约2mm×2mm的大小,加入胶原酶,在37℃的条件下消化,并每隔5分钟轻轻震荡一次或进行持续搅拌。待消化完成后,将细胞悬液转移至离心管,进行离心处理,弃去上层的脂滴泡沫和上清液,使用培养基重新悬浮沉淀。随后过滤细胞悬液,再次离心后弃去上清液,以培养基重悬细胞,并接种于培养瓶中。最后,将培养瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。

3. 注意事项

在实验过程中,需保持无菌操作,避免细胞污染。脂肪组织的剪取与清洗需谨慎,以防损伤细胞或引入杂质。消化过程中要严格控制时间和温度,以防过度消化导致细胞受损。此外,离心和过滤步骤应轻柔操作,以避免细胞损失或破裂。

遵循以上步骤将有助于获得高质量的原代脂肪间充质干细胞,尊龙凯时致力于为科学研究和临床应用提供可靠的细胞来源。