产品简介

衍生化技术的发展主要是为了提升目标物质的可检测性，从而增强检测器对目标物质的响应能力。在弱碱性溶液条件下，OPA和3-MPA能够与氨基酸中的羰基和氨基进行有效反应，形成衍生物。经过紫外光激发后，这些衍生物能够释放出波长大于激发光的荧光信号。衍生物的荧光强度与其浓度成正比，这使得我们可以准确计算样品中氨基酸的含量。这种检测方法具有快速、高准确率、高灵敏度和广泛适用等优点，非常适合生物医疗领域的应用。

货号名称及规格

SDK1010 氨基酸衍生化试剂盒（OPA法，不含标准品），规格为25T/50T，储存条件为2-8℃。如需更多信息，请联系网站负责人。

组分及实验步骤

1. 流动相A的配制：在瓶中加入适量超纯水，分别溶解流动相A1、A2和A3。溶解液体需要转移至1L容量瓶中，并用超纯水冲洗瓶壁1-2次，确保所有试剂完全被移出，最后用超纯水定容至1L，混匀并通过022μm有机相膜过滤后备用。

2. 流动相B的配制：在瓶中加入适量超纯水，溶解流动相B液体后，将其转移至1L容量瓶，再用超纯水冲洗瓶壁1-2次。随后加入400mL色谱级甲醇和400mL色谱级Y腈，最后用超纯水定容至1L。混匀并过滤备用。

3. 将配制好的流动相A、B进行超声处理30分钟，以去除溶剂中的气体，防止色谱柱的堵塞，从而影响实验结果。

4. 标准溶液的配制（标准品需用户自备）：取一定量氨基酸标准品，用0.1M HCl溶解为100μg/mL或1mM的标准溶液，并经过022μm水相膜过滤。

5. 衍生试剂的配制：取60mg试剂一，加入0.5mL试剂二、4.5mL试剂三和50μL试剂四，混匀并避光保存。按此配方可获得约5mL的衍生化试剂，适用于25次手动衍生，实际操作时可根据需求进行适当调整。

实验流程

1. 开启电脑，打开液相色谱仪的各模块开关（使用FLD检测器），并安装C18色谱柱（46×250mm，耐水性≥90%）。启动软件，在方法组中设置柱温为35℃，流速为1mL/min，激发波长为340nm，发射波长为450nm，设置洗脱程序，走样时间60分钟，保存方法组。

2. 进样前，需用初始流动相（流动相A：流动相B=90:10）平衡色谱柱30分钟或更久，待基线稳定后开始进样。

3. 对于自动衍生，设定进样程序：吸取氨基酸标准溶液1μL、2μL衍生试剂（提前过滤过022μm有机相膜）、2μL试剂三（提前过滤过022μm水相膜），混合5次，等待1分钟后进样。

4. 若色谱仪没有自动衍生功能，则可进行手动衍生：吸取氨基酸标准溶液100μL，加入200μL衍生试剂和200μL试剂三，涡旋混合5次，每次30秒，静置1分钟后过滤，通过022μm有机相膜进行上样。

5. 实验中需同时进行空白对照，使用等量0.1M HCl重复上述步骤，以有效排除潜在干扰。

检测结果示例

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