左旋咪唑是一种合成的驱虫药物,广泛应用于兽医学,以治疗由线虫引起的寄生虫感染。作为一种有效的驱虫药,左旋咪唑针对线虫乙酰胆碱离子通道受体发挥作用(Martin等)。除了其医学应用外,左旋咪唑在各个研究领域也得到了广泛使用,尤其是在秀丽隐杆线虫的麻痹实验中。该药物能够导致线虫瘫痪,这对研究神经元功能及肌肉生理学具有重要意义。为了深入了解毒理学实验,下面将介绍一个利用左旋咪唑的实验例子,研究人员可借此作为框架,使用不同的可溶性药物开展毒性研究。
材料包括:带盖6孔板、NGM培养基、M9缓冲液、左旋咪唑-原液(100mM水溶)、同步成虫种群以及WMicrotrackerArena设备。实验步骤简单:
1. 微孔板制备:按照标准程序制备NGM;在加入盐和胆固醇后,将左旋咪唑立即加入55℃的NGM琼脂溶液中;将左旋咪唑片未接种OP50中;制备后两周内可使用,保存在4℃的容器中;测定是在实验开始前将模板降至室温的板上进行。
2. 在NGM培养皿中培养同步成虫种群(OP50);
3. 用M9缓冲液将蠕虫从培养皿中取出,转移到15毫升无菌试管中;
4. 让蠕虫静置,倒出上清液,注意不要扰乱沉淀;
5. 用5ml的M9缓冲液进行洗涤,短暂摇动或翻转试管;
6. 重复上述步骤。倒出上清,加入3ml的M9缓冲液;
7. 数出三份,每10μl计数虫数,并计算平均值;
8. 制备悬浮液,达到[35虫/10μl];
9. 将10μl的虫液转移至6孔板;
10. 使用WMicroTrackerARENA观察蠕虫活动;
备注:至少进行三次技术重复,至少进行两次生物重复。
实验结果显示: 左旋咪唑对N2运动活性的剂量抑制反应曲线评估不同浓度的左旋咪唑(0µM(对照)、100µM和200µM)的治疗效果。在6孔板中,每孔挑选35个年轻成虫N2,在23℃下记录4小时的运动活动。数据代表四个独立实验的平均值,进行重复实验。
有关更多信息,欢迎关注尊龙凯时官方微信(微信公众号:Bio-Gene)回复“行为测定”,查看更多相关视频。长按/扫描二维码识别关注公众号,获取最新动态。
如果您对生物医疗领域有进一步的兴趣或需求,欢迎联系尊龙凯时,我们致力于为您提供专业的解决方案与服务。