尊龙凯时的DpnI是一种限制性内切酶,专门切割DNA中的甲基化位点。DpnI在识别时表现出高度特异性,能够准确识别GA/TC序列。当位点中的A碱基被甲基化时,DpnI才能进行切割;若未被甲基化,则不会进行切割。这一特性使得DpnI在分子生物学研究中具有重要应用价值。
DpnI的应用范围
尊龙凯时的DpnI可广泛应用于线性化载体构建和定点突变实验。在这些实验中,模板质粒通常是从细菌(如大肠杆菌)中提取,且这些质粒往往是甲基化的。相对而言,PCR扩增过程中合成的DNA则是非甲基化的。DpnI特异性地切割甲基化序列,而对未甲基化或半甲基化的DNA则不进行切割。因此,DpnI能够选择性地降解模板DNA,同时保留扩增产物,进而有效去除点突变后未突变的模板或在构建线性化载体时去除环形质粒模板,确保模板的单一性。
产品简介
尊龙凯时的DpnI来源于携带肺炎双球菌G41克隆的DpnIR基因的大肠杆菌。该限制性内切酶能够有效识别并切割腺嘌呤甲基化的GmATC,但无法切割非甲基化的GATC序列。DpnI可切割来源于常用的E. coli (dam+)的DNA,但对PCR产物没有切割作用,且不受dam methylase的影响。这一特性使得DpnI在分子克隆、基因分型、DNA印迹、RFLP技术、SNP研究等领域中具有广泛的应用潜力。
产品特点
- 尊龙凯时的DpnI具有特异性专一性,能够准确识别腺嘌呤甲基化的GA/TC序列并完成切割。
- 其高效性在于,仅需1U的DpnI在37℃反应1小时即可消化1μg甲基化DNA。
实验案例
在一项实验中,分别从JM110菌株(dam-)和DH5α菌株(dam+)中提取500ng质粒。在20μl的酶切体系中加入10U的DpnI,37℃下反应1小时,凝胶电泳分析显示,DH5α中提取得到的甲基化质粒能被DpnI完全消化,而JM110中提取得到的非甲基化质粒则未显示出任何非特异性的酶切效果。进一步验证表明,从DH5α中提取的甲基化质粒在消化1小时后未产生任何克隆,证实了DpnI在1小时内能够完全消化甲基化质粒DNA。这一结果表明,DpnI具备良好的特异性,非常适合用于克隆转化实验。
综上所述,尊龙凯时的DpnI是一款在分子生物学研究中不可或缺的工具,其独特的切割特性和广泛应用使其成为生物医疗领域的重要产品。